Pourquoi le kit RIDASCREEN SET A,B,C,D,E nécessite-t-il l'utilisation de 2 substrats dans sa procédure d'analyse?
1 réponse
Il y a un seul substrat dans le coffret R4101 RIDASCREEN SET A,B,C,D,E
Ce substrat est le Red Chromogen Pro coloré en rouge flacon capuchon marron et prêt a l’emploi. C’est une solution stabilisée d’un mélange de substrat/chromogène.la solution contient :
- TMB (3,3’,5,5’-tétraméthylbenzidine) : un chromogène qui devient bleu lorsqu’il est oxydé par la peroxydase
- Peroxyde d’hydrogène (H2O2) : un agent oxydant qui réagit avec le TMB en présence de l’enzyme HRP
- Tampon : maintien un pH optimal pour la réaction enzymatique
- Stabilisant : garantissent la stabilité de la solution pensant le stockage.
Mais il y a deux conjugués et la procédure est la suivante :
En ajoutant l’échantillon dans les puits A à G (voir les lettres sur le côté gauche du cadre) et le contrôle positif dans le puits H, les toxines présentes se lient à des anticorps de capture spécifiques. Les composants de l’échantillon qui ne se lient pas aux anticorps sont ensuite éliminés lors de l’étape de lavage. Les toxines immobilisées sont liées par un mélange d’anticorps spécifiques conjugué à la biotine. Tous conjugué non lié est ensuite éliminé lors d’une étape de lavage. Après l’ajout de la streptavidine-POD ainsi qu’une étape de lavage supplémentaire, la détection est réalisée par l’ajout de la solution substrat/chromogène. Le conjugué streptavidine-POD lié transforme le substrat/chromogène rougeâtre en un produit final bleu. L’ajout de la solution d’arrêt provoque un changement de couleur du bleu au jaune. La mesure est effectuée photométriquement à 450 / 620 +-10 nm. L’absorbance est proportionnelle à la concentration de SET dans l’échantillon.
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