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note applicative AR_BOD_OECD301F_lab_01_E fr
 
                        
                    Contenu du document
                                                DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	1 de	 	
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Rapport	 d'application	 	
Mesure de la DBO : Détermination de la	 	
biodégradabilité immédiate des produits	 	
chimiques selon OCDE 301 F	 	
(respirométrie	 manométrique)	 	
Méthode	 de mesure	 : Respirométrie,	 mesure de la pression différentielle 	 	
Plage	 de 	mesure	 : 0-100%	 de	 dégradabilité biologique ; pression : 500	-1350 hPa	 	
Matériel	 de mesure	 : Têtes de mesure de la	 pression	 	
Remarque : Les têtes de mesure de pression utilisées doivent	 offrir la 	possibilité de sortir la 	
pression différentielle. Ce n'est pas	  le cas de	 tous 	les systèmes.	 	
Veuillez consulter le fabricant de votre instrument concernant	             cette	 possibilité avant la 	
mesure.	 	
pH	-mètre	 : 	
-Résolution minimale de 	l'affichage de la 	valeur du	 pH	 : 0,01 	 	
électrode de pH	 : 	
-Membrane	 : membrane cylindrique,	 sphéri	que ou	 conique	 	
 
-Membrane	 : anneau	 fendu ou	 membrane à	 trou	 	
 
 
Accessoires	  	 	
-Plate	-forme	 d'agitation	 magnétique	 pour	 flacons	 d'échantillon	 	
-Flacons 	d'échantillon, bruns, avec un volume de	 510 ml (min. 4 pièces)	 	
-Tiges	 d'agitation	 avec extracteur	 de	 tige	 d'agitation	 	
-Armoire	 thermostatique	 (temp=	 20	 °C ou température	 à choisir)	 	
-Manchons	 en caoutchouc	 	
-Récipient opaque pour l'aération de la	 solution	 d'inoculation	 	
biologique	 (V	 1 l) 	
-Filtre	 ou	 décanteur	 	
-Échelles	 de laboratoire	 	
-Pompe	 d'aération avec fritte	 	
-Centrifugeuse pour le traitement d'un échantillon de boue si	 nécessaire	 	
-Pipettes variables avec V = 20 ml et autres	 accessoires 	    selon	 les besoins.	 	
-Fioles	 de 1000	 ml	 (7 pièces)
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Réactifs	  	 	
-Pastilles	 d'hydroxyde	 de	 sodium	 	
-Solution	 de NaOH	 0,1 M	 	
-Solution	 de HCl	 0,1 M	 	
-Concentré	 de HCl	 	
-NaEDTA	 	
-Dihydrogénophosphate	 de	 potassium	 	
-Hydrogénophosphate	 dipotassique	 	
-Hydrogénophosphate	 disodique	 dihydraté	 	
-Chlorure	 d'ammonium	 	
-Sulfate	 de	 magnésium heptahydraté	 	
-Chlorure	 de	 calcium	 	
-Chlorure	 de	 fer	 (III)	 hexahydr	até	 	
-Additifs	 pour	 dissoudre	 la substance	 d'essai,	 si nécessaire.	 	
-Solutions	 tampons	 techniques,	 pH	 7,00 et	 10,0	 	
 
Description du	 	
processus de	 	
mesure	 	
La substance dont on veut analyser la biodégradabilité est	 	
dissoute dans un milieu minéral inoculé par de	s bactéries et	 	
incubée à température constante pendant 28 jours. Les	 processus 	
de décomposition dus aux bactéries provoquent	 l'oxydation de la	 	
substance à	 tester dans	 la solution	 de	 mesure	 où une partie de 	
l'ox	ygène est consommée à partir de la phase	 gazeu	se de la 	
bouteille de mesure. Le dioxyde de carbone 	qui en résulte par un	 	
absorbant (principalement des granulés de	 Na OH) et ainsi 	
éliminé de la phase gazeuse du flacon. La	 pression négative qui 	
s'accumule lentement est directement	 proportionnelle à l'oxy	gène 	
consommé et constitue donc un	 indicateur	 clé	 caractéristique	 de	 	
la vitesse	 de	 décomposition	 de	 la microbiologie employée.	 	
En	 calculant	 la consommation	 d'oxygène	 théoriquement	 attendue 	
pour l'	oxydation de la substance d'essai complète, le	 taux de 	
décom	position des micro	-organismes pendant la période	 	
d'observation peut être spécifié en pourcentage de la	 	
décomposition	 complète théorique.	 	
Si le calcul de la demande théorique en oxygène n'est pas	 	
possible, le rapport moins définitif entre la consommation ré	elle	 	
d'oxygène mesurée et la DCO de la solution de mesure peut	 	
toujours être spécifié comme étant la dégradabilité biologique.	 	
Cette spécification doit cependant être 	particulièrement	 	
marquée	 par l'ajout de "x% de DCO".	 	
 
Besoins en déionate	 	
ou en distill	at pour la	 	
préparation	 du	 milieu	 	
minéral	 	
Seule l'eau déminéralisée ou distillée, exempte de substances	 	
toxiques telle	s que le cuivre ou les solvants, convient pour la	 	
préparation du milieu minéral. De telles impuretés toxiques	 	
peuvent déjà être présentes 	à la fois dans l'eau non traitée à	 	
partir de laquelle le déionat ou le distillat est produit et également	 	
introduites 	par le processus de traitement tel que le filtrage à	 	
travers un échangeur d'ions, par exemple. En cas d'écart	 	
excessif des valeurs et de t	aux de décomposition anormalement	 	
bas, l'eau doit également être examinée ultérieurement à l'aide	 	
de	 méthodes analytiq	ues appropriées en	 cas d'incertitude.
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En outre, la proportion de carbone organique dans le milieu	  minéral ne doit pas être 	
supérieure à 1	0 % de la teneur en	 carbone	 organique introduite	 par la	 substance 	
d'essai.	 	
 
Afin de 	vérifier le respect de ce seuil, il est recommandé	 d'effectuer une mesure basée 	
sur la méthode LC	-OCD (Liquid	 Chromatography	 - Organic Carbon Detection).	 	
Dans tous les cas,	 l'eau provenant du même lot de 	traitement doit	 être utilisée pour 	
chaque série de t	ests.	 	
 
Définition	 des	 termes	 : 	
Substance d'essai	 : 	
Substance	 dont	 la dégradabilité	 biologique	 doit	 être	 testée.	 	
 
Médium	 minéral :	 	
Solution saline produite selon une recette	 spécifique et utilisée	  pour définir les conditions 	
osmotiques des 	micro	-organismes.	 Cette solution est nécessaire pour la dilution de 	
toutes les	 préparations.	 	
 
Inoculum	 : 	
Solution qui peut être produite à partir d'un large éventail de	 sources telles que d	es boues 	
activées  ou  des  échantillons	 d'eau	 de	 surface	 et qui	 conti	ent	 les	 micro	-organismes	 	
nécessaires	 à la	 décomposition.	 	
 
Solution de mesure : 	 	
Mélange de milieu minéral, d'inoculum et	 de solution mère qui est versé dans les flacons 	
de mesure où	 s'effec	tue	 la mesure proprement	 dite.	 	
 
Solution mère :	 	
Solution de la 	substance à tester dans un 	milieu 	minéral qui sert à assurer une entrée 	
homogène de la	 substance	 à tester dans la	 solution de mesure.	 	
 
Blanc	 d'inoculum	 : 	
Solution de milieu minéral et d'inoculu	m qui peut être 	utilisée par	 calcul pour compenser 	
l'absorption	 d'oxygène due aux	 éventuelles impuretés organiques de l'inoculum et sert	 	
également de milieu	 pour les substances	 insolubles.	 	
 
Travail	 préparatoire	 : 	 	
Inoculum :	 	
L'inoculum biologique peut être	 obtenu à partir d'un large	 éventail de sources. Un 	
échantillon de boue provenant de	 l'étape biologique d'une station d'épuration des eaux 	
usées	 est donc tout aussi envisageable qu'un échantillon 	provenant d’une eau	 de 	
surface.	 	
 
Il est seulement important 	ici que l'échantillon soit	 suffisamment aéré pendant	 le 	
transport et pendant 	les temps de	 séjour prolongés.
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Pour la préparation recommandée ici où la solution de	 mesure de 1 l contient 20 ml 	
d'inoculum, la concentration de	 matières organiques dans l'	inoculum 	ne doit pas 	
dépasser	 1,5 g/l.	 	
 
Si	 des	 solutions	 de	 composition	 différente	 sont	 utilisées,	 la concentration  de  matières 	
organiques doit être limitée à 30 mg/l	 dans	 la 	solution de mesure	. 	
 
Si cela ne peut être clairement garanti après filtrage ou	 décantation, la boue doit être 	
séchée et	 la 	proportion finale de	 matière solide pesée et l'inoculum dilué avec du milieu 	
minéral	 selon les spécifications avant d'être ajouté à la solution de	 mesure.	 	
 
Un certain nombre d'options de traitement pour différentes	  sources	 d'inoculum 	
biologique sont p	rése	ntées	 dans [1].	 	
Des instructions détaillées concrètes sont données ici pour la	 concentration et la dilution, 	
pour le lavage, la centrifugation,	 l'homogénéisation et le conditionnement des boues aux	 	
conditions d'utilisation, en particulier pour les trai	teme	nts où	 des substances inhibitrices 	
ou toxiques sont suspectées. Si	 votre inoculum nécessite un prétraitement spécifique en 	
raison	  de sa propriété (par exemple, trop visqueux, impur ou non	 adapté aux conditions 	
de mesure), 	veuillez	-vous	 référer aux	 inst	ruct	ions	 détaillées dans cette littérature.	 	
 
Conditionnement	 de	 la biologie	 : 	 
Pour acclimater les micro	-organismes aux conditions 	osmotiques de	 la solution de mesure, 	
il peut être nécessaire de les	 conditionner avant de les utiliser. Pour ce faire, on 	pro	duit une	 	
solution dont la concentration est d'environ 3 à 5 g d'inoculum	 pour un litre de milieu 	
minéral. Ce mélange est aéré pendant 5 à	 7 jours dans un récipient opaque et, en tant 	
qu'inoculum	 maintenant conditionné, peut ensuite être utilisé pour ino	cul	er	 directement	 le 	
milieu minéral utilisé	 pour la mesure.	 	
Si des boues sont utilisées pour cette préparation, la solution	 doit être diluée avant 	
l'inoculation une nouvelle fois par un	 facteur 5 afin de garantir que la teneur en matières 	
solides	 introduit	e d	ans la solution de mesure soit inférieure à 30 mg/l	 dans chaque cas. 	
Dans ce cas, il n'est pas nécessaire de	 déterminer la masse sèche car la teneur en 	
matières solides 	a été	 réduite en conséquence par la	 forte dilution.	 	
 
Le conditionnement peut égaleme	nt 	être utilisé dans certains cas	  pour augmenter la 	
précision du processus global si des écarts	 statistiques	 plus importants	 sont constatés	 lors 	
de l'analyse.	 	
 
Préparation	 du	 milieu	 minéral :	 	 	
Quatre solutions salines sont nécessaires pour la 	préparation du 	milieu	 minéral.
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Note	 : 	
N'utilisez que de l'eau répondant aux exigences 	susmentionnées 	   et des réactifs de qualité 	
analytique pour produire les solutions	 salines	 suivantes.	 	
 
Solution	 1 : solution	 tampon phosphate	 à pH	 7,4	 	
Ajouter	 8,5	 g de	 dihydrogénophosp	hate	 de	 potassium	 (KH	2 PO	4), 21,75	 g d'hydrogénophosphate	 	
dipotassique	 (K	2 HPO	4), 	
33,4	 g d'hydrogénophosphate	 disodique	 dihydraté	 (Na	2 HPO	4 *7H	2O) et 0,5	 g de	 chlorure	 	
d'ammonium	 (NH	4 Cl)	 dans un ballon doseur de 1000 ml rempli d'environ 500 ml	  d'eau,	 pui	s 	
mélanger en agitant doucement.	 	
Remplissez	 jusqu'au	 repère	 d'étalonnage	 et secouez	 à nouveau.	 	
 
Note : Le pH de cette solution tampon doit être de 7,4± 	0,2 sans	 autre ajustement.	 	
 
Solution 2 : Chlorure de calcium, solution à 27,5 g/l	  	
Ajouter	 27,5	 g de	 chl	orure	 de	 calcium	 anhydre	 (CaCl	2) (ou une quantité équivalente 	
si l'on utilise 	l’hydrate 	    (par	 ex.	36,4	 g CaCl	2 *2H	2O))	 dans un ballon doseur de 1000 ml 	
rempli d'environ 500	ml 	d'eau,	 puis	 mélanger en agitant doucement.	 	
Remplissez	 jusqu'au	 repère	 de	 calib	rage	 et secouez	 à nouveau.	 	
 
Solution 3 : Sulfate de magnésium heptahydrate, solution de	 22,5	 g/l	  	
Ajouter	 22,5	 g de	 sulfate	 de	 magnésium	 heptahyd	rate 	           (MgSO	4 *7H	2 O) à un ballon doseur 	
de 1000 ml rempli	 d'environ	 500 ml	 d'eau, puis mélanger	 en agitant dou	cement.	 	
Remplissez	 jusqu'au	 repère	 de	 calibrage	 et secouez	 à nouveau.	 	
 
Solution  4  :  chlorure  de  fer  (III)  hexahydraté,  solution  de	 0,25	 g/l	 Ajouter	 0,25	 g de	 	
chlorure	 de	 fer	 (III)	 hexahydraté	  (FeCl	3 *6H	2O)	 dans  un  ballon  doseur  de  1000  ml 	
rempli d'environ 	500 ml	 d'eau,	 puis	 mélanger en agitant doucement.	 	
Remplissez	 jusqu'au	 repère	 de	 calibrage et	 secouez	 à nouveau.	 	
Note : Pour garantir la stabilité à long terme de la solution 4,	 ajouter	 une goutte de	 HCl	 	
concentré ou 0,4 g de	 NaEDTA.	 	
 
Remplir ensuite un bal	lon de mesure de 1000 ml avec environ	 800	 ml	 d'eau,	 ajouter	 10	 ml	 	
de	 la solution	 1 à l'aide	 d'une	 pipette,	 puis	 mélanger	 cette	 solution	 en	 l'agitant	 légèrement	 	
pour obtenir le milieu minéral. Ajoutez ensuite 1 ml de chacune	 des	 solutions	 2 à 4 et	 	
remplisse	z le flacon	 doseur	 d'eau	 jusqu'au	 repère de calibrage
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Solution mère de la 	substance à	 tester	 : 	
 
Si possible, la substance à tester doit être dissoute dans une	 solution mère avant d'être 	
ajoutée à la solution de mesure 	afin de	 garantir une introduction ho	mogène dans la 	
solution de	 mesure.	 	
 
Assurer la meilleure homogénéité possible avant de produire la	  solution mère, en 	
particulier lors de l'analyse de mélanges	 solides dans lesquels la concentration de la 	
substance à 	test	er 	est particulièrement faible. Tou	s les autres constituants	 contenus dans 	
un mélange doivent également être testés	 séparément pour leur dégradabilité biologique 	
afin de garantir	 que la consommati	on d'oxygène se produit uniquement par	 décomposition	 	
de la substance à tester.	 	
 
Les émulsifiant	s et autres additifs qui garantissent la solubilité	 des substances à tester 	
peuvent être utilisés s'ils ne sont ni	 décomposables ni toxiques pour la biologie et 	s'ils 	
n'entraînent	 pas d'autres perturbations du processus de mesure telles qu'un	  moussage 	
ext	rême ou une surchauffe due à des réactions	 exothermiques.	 	
 
L'utilisation  de  substances  porteuses  solides  pour  les  matériaux	 solides  à  tester  n'est  pas 	
conseillée	, bien que l'utilisation de tels	  additifs	 puisse	 être utile	 pour les	 substances d'essai	 	
huileus	es.	 	
 
Dans tous les cas, lorsqu'on utilise un additif, il faut ajouter une	 autre préparation de la 	
série d'essais qui ne contient que 	l’addi	tif d	ans le milieu min	éral inoculé. Si plusieurs 	
additifs sont utilisés,	 chacun d'entre eux doit être testé. Les addi	tifs ne sont autorisés	  que 	
s'ils ne présentent pas de dégradabilité dans ces valeurs à	 blanc.	 	
 
A l'aide des méthodes de mélange autorisées, on obtient une	 solution mère aqueuse (avec 	
milieu minéral) de la substance à	 tester d'une concentration d'environ 1	-10 g/l. Cette valeur 	
ne 	doit être	 considérée	 que	 comme	 une indication	 approximative	 car	 des valeurs inférieures 	
peuvent être possibles en fonction de la	 so	lubilité,	 par exemple.	 	
Si l'on ne dispose que d'une petite quantité de la substance	  à tester, il fau	t préparer 	
des petites quantités	 correspondantes	 d'une solution	 mère.	 	
Cependant, la concentration exacte de la substance à 	tester 	   dans	 la solution	 mère d	oit	 	
être connue,	 dans	 tous	 les cas.	 	
 
Si la substance d'essai est totalement insoluble dans l'eau,	 mê	me avec les additifs 	
autorisés, il faut suivre les indications de	  la section intitulée	 "Procédure pour une substance 	
d'essa	i totalement insoluble	 ».
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Calcul	 de	 la demande	 théorique en	 oxygène	 ThOD	 	
 
La demande théorique en oxygène ne peut être calculée	 que	 si la composition 	
chimique de la substance à tester	 est 	connue.	 	
 
Si elle n'est pas connue, il faut détermine	r la DCO de la	 substance à tester [2] et 	
effectuer les calculs décrits avec	 cette valeur au lieu de la DOD. Dans ce cas, il est 	
impératif	 de	 marque	r le	 résultat comme	 "x	 %	 DCO".	 	
 
Pour	 une substance	 dont la formule	 chimique est	 Cc Hh	 Clcl Nn	 Nana Oo Pp Ss	, le ThOD est 	
calculé selon les	  formules données ci	-dessous où les lettres majuscules	 représentent les 	
éléments chimiques respectifs et les 	petites 	  capitales	 d'indice les	 nombre d'atomes dans une 	
molécule de la substance testée.	 Si 	une	 n'est 	pas présent dans sa molécule, la valeur de son 	
indice 	doit être	 mise	 à zéro.	 	
 
 
M représente	 la masse	 molaire	 de	 la substance	 à 	tester en	 g/mol	 	 	
Les données entr	e crochets représentent les unités des 	valeurs	  et ne sont	 mentionnées 	
que	 pour des raisons d'exhaustivité.	 	
L'unité du ThOD est interprétée comme étant 	un mg 	    d'oxygène	 par mg de	 	
substance	 d'essai utilisée.	 	
 
 
S'applique	 à l'oxydation sans	 nitrification	 : 	
 
 	
ThOD	=	
16	[	g
mol	]*(2c	+	1
2(h-cl-3n	)+	3s	+	5
2p+	1
2na	-o)*[mg
mg	]	
M	[	g
mol	]	
 
S'applique à l'oxydation	 avec 	   nitrification	 : 	
 	
ThOD	=	
16	[	g
mol	]*(2c	+	1
2(h-cl)+	5
2n+	3s	+	5
2p+	1
2na	-o)*[mg
mg	]	
M	[	g
mol	]	
 	
 
Sélectionnez la formule en fonction du	 processus 	de d	écomposition	 attendu.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	12	 de	 	
14	 	
 
 
Mise	 en	 œuvre	 	
1 litre d'une solution de mesure comprenant un inoculum, 	un stock de solution et un milieu	 	
minéral doivent être produits 	où la	 concentration	 précise	 de la	 	
substance à tester dans la	 solution	 de	 mesure	 doi	t être	 calculée.	 	
 
Utilisez la concentration de la solution mère que vous avez	  produite pour calculer le 	
volume de cette solution qui doit	 être pipeté dans un ballon de mesure de 1000 ml 	
afin de	 déterminer une concentration de 100 mg/l de substance à	 teste	r dans	 la 	
solution	 de mesure.	 	
 
Exemple	 : 	
 
La ligne directrice est la suivante : une concentration de 100	 mg/l de substance à tester 	
dans un	 ballon de mesure de 1000	 ml	 doit être	 produite dans la	 solution de mesure.	 	
?	 C = 100	 mg/l et V=1 l	
 
Pour	 la masse	 m,	 la  formule	 c=	m
V résulte 	de	 : 	 	
 	
m=c *V	 =100 mg/l * 1	 l =100	 mg = 0,1 g.	 	
 
En d'autres 	termes, il doit y avoir 0,1 g de la substance d'essai	  pure	 dans la solution de 	
mesure.	 	
 
La substance à tester est cependant présente dans la	 solution mère, il faut donc	 	
pipeter le volume correspondant	 de	 la solution	 mère	 dans	 le flacon	 de	 la solution	 de	 	
mesure.	 	
 
Si votre solution mère a une concentration de c= 5 g/l,	 par exemple, alors	 : 	
c=	m
V?	V=	m
c=	0.1g
5gl	
=	0.02l	=	20m	l 	
 
Dans ce cas, il faut donc pipeter 20 ml d	e la solution mère dans	  le flacon de mesure de 1 l 	
afin d'obtenir une 	concentration de	 100 mg/l de substance à tester dans la solution de 	
mesure	 après	 remplissage.	 	
 
Verser environ 500 ml de milieu minéral dans un flacon 	doseur de	 1 l et y déposer à la 	
pip	ette la quantité calculée de solution	 mère.	 	
Ajoutez ensuite 20 ml de 	l'inoculum et remplissez le 	flacon d	e milieu minéral jusqu'à 	
quelques cm en dessous de la	 marque.	 	
 
Mesurez	 la valeur du pH	 de la solution.	 	
Si nécessaire, ajuster la valeur du pH avec quel	ques gouttes	 d'une	 solution	 de	 NaOH	 0,1	 M 	
ou	 de	 HCl	 0,1	 M jusqu'à	 une	 valeur	 de	 pH	 7,4	±0.2	. Remplir	 ensuite la	 fiole	 de milieu	 minéral	 	
jusqu'au	 repère d	’étalonnage.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	14	 de	 	
14	 	
 
 
 
Comme	 une	 double	 détermination	 de	 la solution	 de	 mesure	 est recommandée pour 	
chaque étape	 de mesure, la 	solution	 de mesure utilisée doit être divisée en 2 flacons de 	
mesure.	 Remplir chacun des deux flacons de mesure avec 300ml de la	  solution de 	
mesure. Ce volume a été choisi de manière à ce	 que, lorsque le flacon est fermé, la 	
solution de mes	ure ait	 encore	 un volume de gaz suffisant.	 	
 
Note	 : 	
Si l'on veut analyser la 	décomposition abiotique 	de la	 substance	 à tester,	 il faut,	 avant 	
l'incubation,	 mélanger	 la solution de mesure	 avec une	 substance toxique pour les micro	- 	
organismes, par exemple une	 concentration suffisante d'ions	 cuivre. Il est bien sûr 	
recommandé ici de renoncer à l'inoculum	 même	 lors de la préparation de la solution	 de	 	
mesure.	 	
 
Pour tenir compte, dans le calcul, d'une éventuelle absorption	  d'oxygène due à la 	
décomposition de subs	ta	nces organiques	  dans l'inoculum, il faut préparer un blanc 	
d'inoculum. Une	 double détermination est également recommandée dans ce	 cas.	 	
 
Versez 20 ml de l'inoculum dans un flacon doseur de 1 l et	 remplissez le flacon de milieu 	
minéral jusqu'à quelques cm 	en	  dessous	 de	 la marque.	 	
 
A ce stade, il est absolument crucial d'utiliser le même inoculum	  en même quantité que 	
pour l'inoculation de la solution de	 mesure car la concentration en micro	-organismes et en	 	
impuretés	 organiques	 n'est	 pas	 connue.	 Cette	 valeur	 à blanc	 est déduite de l'absorption 	
d'oxygène de la solution de mesure	 et doit refléter le plus fidèlement possible la 	
consommation	 d'oxygène des substances organiques de l'inoculum contenu	 dans	 la 	
solution de mesure.	 	
 
Mesurez maintenant la valeur d	u pH d	u blanc d'inoculum.	 Si nécessaire, ajustez la 	
valeur du pH avec quelques	 gouttes d'une solution de NaOH 0,1 M ou d'une solution 	
de 	  HCl	 0,1 M jusqu'à une	 valeur de	 pH	 7,4	±???. Remplir	 ensuite	 le flacon	 jusqu'au	 	
repère	 avec	 du 	milieu	 minéral.	 	
 
Remplir chac	une des deux bouteilles de mesure avec 300 ml	  de	 l'inoculum vierge.	 	
 
Placez 2 à 3 pastilles de NaOH dans le goulot de chacun des 4	 flacons	 de	 mesure	 équipés	 	
de	 manchons	 en	 caoutchouc	 et vissez	 les têtes de mesure sur les flacons.	 	
 
Incuber	 les	 flacons dose	urs	 ainsi préparés	 pendant 28	 jours à	 20±1°C	.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	16	 de	 	
14	 	
 
 
Note	 : 	
D'autres températures de mesure peuvent être choisies en	  fonction des besoins, mais 	
elles doivent être maintenues	 constantes	 dans un intervalle	 de 1°C pendant la 	
mesure. La ligne direc	trice 301 de l'OCDE	 spécifie une plage de température de 20 à 	
24 °C, bien que la	 plage de température de fonctionnement des têtes de mesure	  (voir 	
Caractéristiques techniques) dicte finalement leur	 utilisatio	n. 	
Avec les têtes de mesure WTW, la plage d'	utilisation 	   admissible	 est comprise 	
entre	 +5°C et +50°C.	 	 
Procédure pour	 	
l'insolubilité totale de	 	
la	 substance	 d'essai	 	
 
Si la substance à tester ne peut être transformée en solution	 	
aqueuse, même en utilisant des additifs, elle doit être pesée	 	
directement da	ns un milieu minéral inoculé comme solution de	 	
mesure. Une double détermination des mesures est également	 	
recommandée	 dans ce cas.	 	
 
Produire un milieu minéral inoculé comme décrit 	dans les	 	
sections précédentes et calculer la quantité pesée de	 	
substance à t	ester nécessaire pour atteindre la concentration	 	
requise de 100 mg/l de substance à tester dans les 300 ml de	 	
la solution de mesure. L'introduction éventuelle de matières	 	
solides p	ar les boues doit être limitée à un maximum de 30	 	
mg/l	 dans la solution de m	esure.	 	
 
Versez 300 ml du blanc inoculé dans chacun des deux	 	
flacons doseurs.	 	
 
Placez la quantité précisément pesée de substance à tester	 	
directement	 dans les flacons de mesure.	 	
 
As	surez	-vous qu'il y a également une homogénéisation	 	
préalable	 ici	 si les	 subs	tances	 d'essai	 sont contaminées.	 	
 
Fermer le flacon doseur avec un couvercle approprié et	 	
s'assurer que la substance à tester a été entièrement	 	
absorbée par la solution de 	mesure en l'agitant plusieurs fois	 	
et	 qu'aucun résidu ne colle aux	 parois du flacon.	 	
 
Utilisez	 ici	 aussi	 une	 valeur en	 double blanc.	 	
 
Mettez 2 à 3 pastilles de NaOH dans le goulot de chaque	 	
flacon doseur équipé de manchons en caoutchouc et vissez	 	
les	 têtes	 de mesure sur les flacons.	 	
 
Incuber les flacons doseurs ainsi préparés pendant 28 jo	urs à	 	
20 	±1°C.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	17	 de	 	
14	 	
 
 
Note	 : 	
D'autres	 	
températures	 de	 	
mesure	 peuvent	 	
être choisies	 en	  	
fonction des	 	
besoins, mais elles	 	
doivent être	 	
maintenues	 	
constantes	 dans	 un 	
intervalle de	 temps	 	
donné.	 	
de 1°C pendant la	 	
mesure. La ligne	 	
directrice 301 de	 	
l'OCDE spécifie u	ne	 	
plage de température	 	
de 20 à 24 °C ;	 	
cependant, la	 	
température de	 	
fonctionnement de	 	
l'appareil n'est pas	 	
indiquée.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	18	 de	 	
14	 	
 
 
La plage de température des têtes de mesure (voir	 Caractéristiques techniques) 	
limite finalement l'utilisation.	 Avec les têtes de mesur	e WTW, la plage d'utilisation	 	
admissible	 est comprise entre +5°C et	 +50°C.	 	
 
Analyse	 : 	S'il n'y a pas d	e pression négative dans la bouteille de mesure	 	
pendant toute la durée de l'essai, il faut supposer une toxicité	 	
microbienne de la substance testée. Si ce	la n'est pas	 	
plausible,	 il faut	 vérifier	 l'étanchéité	 du système	 de	 mesure.	 	
 	
Comme nous l'avons 	mentionné au début de ce document, dans	 	
la section Équipement de mesure, la tête de mesure doit être 
en  mesure d'émettre la pression différentielle comme val	eur	 	
mesurée à partir de laquelle la consommation d'oxygène peut	 	
être calculée. 	C’est la seule façon de reli	er directement la 	
consommation d	’oxygène à l	a quantité pesée.	 	
 
La consommation en oxygèn	e est calculée à partir de 	la mesure de la pression différent	ielle 	
mesurée 	(?p) selon la formule suivante	 : 	
 	
mO2	=	p*V*M
R*T	 	
 	
où	 : 	
V = volume de la phase gazeuse se trouvant au	-dessus de la	  solution	 de	 mesure.	 	
Lorsque vous utilisez les flacons doseurs standard bruns, le	  volume	 se calcule comme 	
suit :	 	
 
V = volume	 de la	 bouteille 	- volume de	 la solution de	 mesure	 	
 
= 0,510 l 	- 0,3 l = 0,21	 l 	
 
Si vous utilisez une autre bouteille de mesure, le volume de	  la phase gazeuse	 doit	 être	 	
calculé en conséquence.	 	
 
M = masse	 molaire	 de l'oxygène = 32	 g/mol	 	
R = Constante 	univers	elle	 des gaz	 = 8,3	14472	J	
mol*K	 	
 
T = température absolue	 pour la	 mesure	 	
 
La température d'incubation de 20°C recommandée ici équivaut	  à une température 	
absolue de 293,15 K.	 	
 
Si vous avez sélectionné une température d'incubation	 différente, la température 	
absolue doit être calculée selon	  la formule suivante :	 	
 
T= 	v+	273.15K	 avec v=Temp	érature en 	°C.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	20	 de	 	
14	 	
 
 
 
Utilisez maintenant la formule spécifiée pour calculer la 	masse 	d'oxygène consommée 	
pour 	chaque pression différentielle	 mesurée.	 	
 
 
Calculez ensuite la valeur 	moyenne des deux 	valeurs 	de	 consommation 	
d'oxygène	 des solutions	 vierges.	 
bm	=	b1	+	b2	
2	 	
Les valeurs moyennes ne peuvent pas être calculées à partir	 des valeurs de 	
consommation 	d'oxygène pour les solutions 	de 	mesure ; une valeur de DBO est 	
déterminée à parti	r des deux	 valeurs à chaque fois et les 2 dégradabilités différentes sont	 	
calculées à partir des deux valeurs qui sont toutes deux	 indiquées	 comme résultats.	 	
 
La	 DBO	 est 	calculée	 selon	 la formule suivante	 : 	
BOD	=	A	
msubstance	 testée	 	
 
La DBO [mg/mg] doit êt	re comprise ici comme un mg d'oxygène	  par	 mg de	 substance 	
d'essai utilisée.	 	
A= absorption d'oxygène corrigée de la solution de mesure	 	
A =	 mO2- bm	 	
 
mO2=valeur de la consommation d'oxygène de la solution de	  mesure	 	
bm 	= valeur moyenne de la consommation d'o	xygène des	  solutions	 à blanc en [mg].	 	
 
msubstance	 testée	= masse	 de	 la substance	 à tester	 dans	 le flacon	  doseur	 (mg)	 	
msubstance	 testée	=c messl	osung	*V	mf 	
 
où 	
c messl	osung	=c	oncentration de la substance 	à tester	 dans la solution 	de mes	ure	 	
Vmf = volume de la solution de mesure dans le flacon de 	mesure (300 ml ici)	 	
 
Calculer une DBO pour chacune des deux valeurs de consommation d'oxygène obtenues par 
la 	double détermination.	 	
  	
On obtient ainsi une valeur DBO1 et une valeur DBO2 qui ont la même valeur tant qu'elles 
remplissent la condition :	 	
 
| DBO	1 - DBO	2 | < 0.1*(	DBO	1 + DBO2	) 	
 
Si cette condition n'est pas remplie, la mesure doit être répétée.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	22	 de	 	
14	 	
 
 
La	 dégradabilité	 biologique D	 est calculée	 selon la	 formule :	 	
 
D=	BOD
ThOD	*100	[%	] 	
Calculez  la 	dégra	dabilité  biologique  pour chacune des deux	 valeurs	 de	 DBO.	 Le	 résultat	 	
est	 que	 les	 deux	 valeurs	 de	  décomposition	 sont égales.	 	
 
Informations sur	 	
la validité de la	 	
mesure	 	
L'absorption d'oxygène de la solution vierge 	d'inoculum évolue	 	
normalement dans une fo	urchette de 20	-30 mg/l et ne devrait	 	
pas dépasser une valeur de 60 mg/l en 28 jours. Si les valeurs	 	
sont plus élevées que celles	-ci, il faut jeter un regard critique sur	 	
la procédure et vérifier les données. En cas 	de doute, une	 	
préparation	 plus intensive	 de l'inoculum	 selon la méthode du	 	
[1]	 est recommandé. Si la valeur du pH basée sur la mesure se	 	
situe en dehors de la plage de pH 6	-8,5 et que la dégradabilité	 	
est inférieure à 60% en même temps, le test doit être 	répété	 	
avec une concentration plus faible de l	a substance testée dans	 	
la solution de	 mesure.	 	
 
Une consommation absolue d'oxygène de plus de 900 mg dans	 	
un flacon ne doit pas être dépassée en une seule étape de	 	
mesure. Si la DOD de la quantité de substance 	pesée dépasse	 	
cette	 valeur, une quantité infér	ieure doit	 être	 utilisée.	 	
 
Littérature	 	 	
[1] Lignes directrices de l'OCDE pour les essais de 	produits 	    chimiques,	 Prêts	 	
Biodégradabilité, Respirométrie manométrique 301F,	 paragraphes	 9 à 15, 1992	 	
[2] Deutsche Einheitsverfahren für Wasser	-, Abwasser	- und	 Schlammu	ntersuchung	 ; Band	 6 	
G-H ; Abschnitte	 H41,	 H43,	 H44	, H45 ; VCH	 	
 
Note	 	
 
Les  informations  contenues  dans  nos  rapports  d'application  sont  uniquement  destinées  à	 	
fournir  une 	description  de  base  de  la  manière  de  procéder  lors  de  l'utilisation  de  nos	 	
systèmes	 de	 mesure.	 Dans	 des	 cas	 isolés	 ou	 en	 présence	 de	 conditions	 générales	 	
particulières	 du	 côté	 de	 l'utilisateur,	 des	 propriétés	 exceptionnelles	 de	 l'échantillon	 respectif 	
peuvent  toutefois  entraîner  une  modification  de  l'exécution  de  la  procédure  ou	 nécessiter 	
des  mesures  supplémentaires  et  peuvent,  dans  de  rares  cas,  conduire  à  ce	 qu'une	 	
procédure décrite ne soit pas adaptée à	 l'application prévue.	 	
 
En	 outre,	 des	 propriétés	 exceptionnelles	 de	 l'échantillon	 concerné,	 telles	 que	 des	 conditions 	
générales particuli	ères, peuvent également conduire à des résultats de mesure	 différents.
DBO	 	
AR_BOD_OECD301F_lab_01_E	 	
BOD_OECD301F	 	05.07.2010	 	23	 de	 	
14	 	
 
 
Les rapports d'application ont été préparés avec le plus 	grand soin. Néanmoins, aucune	 	
responsabilité	 ne peut être	 acceptée quant à l'exactitude	 de ces informations.	 	
 
La	 version	 actuel	le de	 nos	 conditions	 générales	 de vente	 s'applique.	 	
 
Vous	 avez d'autres questions	 ? Veuillez contacter	 notre Centre d'assistance	 à la	 clientèle	 : 	
XYLEM ANALYTICS 	France	 	
Parc de l	’Ile	-29 rue du Port	 	
92000 Nanterre	 	
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                                        Entreprises concernées :
Date d'upload du document :
                                                
                                                        mercredi  4 mai 2022                                                    
                                                 
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                             
                                                            